Аминокислотный анализ

Определение и контроль жизненно необходимых питательных веществ в клетке очень важно для получения максимального выхода белка и обеспечения последовательного процесса синтеза. Готовое решение от компании Waters UPLC®Amino Acid Analysis (AAA) разработано для обеспечения точного и высокоэффективного анализа аминокислот.

img_amino

Аминокислотный анализ по технологии УЭЖХ

  • Дериватизации и химия разделение AccQ • Tag ™ Ultra включает необходимые колонки, реагенты и элюента.
  • ACQUITY UPLC® (смешивание на высокой стороне давления), ACQUITY UPLC H-класс (смешивание на низкой стороне давления) или ACQUITY UPLC H-класс Віо (смешивание на низкой стороне давления) с настраиваемым УФ-детектором, с улучшенным хроматографическим разделением и максимальной чувствительностью.
  • Проекты, которые настраиваются под ваши методы, форматы отчетов для программного обеспечения Empower™.
  • Подключение диагностики приборов INSIGHT® ISDP для обеспечения непрерывной, последовательной и надежной работы в вашей лаборатории.
  • Протоколы квалификации установки, эксплуатации и производительности (IQ/OQ/PQ), обеспечивающих выполнение работы каждого элемента системы для ежедневных воспроизводимых результатов, которые подстраиваются под ваш инструмент, задачи лаборатории по всему миру.

Решение для аминокислотного анализа УЭЖХ обеспечивает контроль над основными факторами, которые обычно вызывают вариативность результатов в анализе аминокислот. От оптимизированного оборудования и контролируемых реагентов к стандартизированным программным проектам, методам, шаблонам отчетов и средствам квалификации, вы руководствуетесь надежным методом - детальный подход, что обеспечивает успешный анализ каждого образца.

Система UPLC для аминокислотного анализа сочетает в себе передовые технологии в области - приборостроение, химию, программное обеспечение, квалификационные инструменты и услуги - специально оптимизированы для исключительной работы, ориентированной на методы. Разработанное учеными для ученых, это решение считается лучшим для нужд вашей программы.

Основные технологии

Ценность аминокислот

Анализ аминокислот необходим в нескольких областях исследований, и является основополагающим инструментом для анализа продуктов. Применение такого анализа требует различных требований к аналитическому методу, поскольку аминокислоты выполняют разные роли.

  • Аминокислоты являются основными составляющими белков. Качественный и количественный анализ аминокислотного состава гидролизованных образцов чистых белков или пептидов используется для идентификации материала и непосредственно измерения его концентрации.
  • Аминокислоты также являются промежуточными соединениями метаболических путей, часто включая белки. Аминокислоты измеряют как элементы физиологических и пищевых исследований. Это оказалось особенно важным при мониторинге роста клеток в культурах, используемых в производстве биофармацевтических препаратов.
  • Подобные рассуждения приводят к тому, что проводятся анализы продуктов питания и кормов для обеспечения соблюдения оптимального количества питательных элементов в пище.

Благодаря аминокислотному анализа с УЭЖХ вы получаете лучшее разрешение и чувствительность, которые достигаются за короткую продолжительность анализа:

  • Надежность метода минимизирует вариативность результатов.
  • Лучшая разрешение, которое дает точные результаты.
  • УЭЖХ обеспечивает большую пропускную способность, чем традиционная ВЭЖХ.
  • Характеристика белка ускоряется для сравнения состава аминокислот, выведенного из последовательности генов продукта или его природного аналога.
  • Избегайте дорогого изменения состава основных пищевых компонентов.

Оптимизированная идентификация пика

Химия веществ AccQ • Tag ™, которые используются в анализе аминокислот по технологии УЭЖХ, является комплексным и полностью испытуемым набором реагентов, колонок и элюентов, оптимизированных для использования с системами ACQUITY UPLC, ACQUITY UPLC H-класс и ACQUITY UPLC H-класс Bio. Благодаря замечательной раздельной способности всех аминокислот, вы идентифицируете пики и их количественный состав, что, в свою очередь, обеспечивает точность полученных результатов.

Эта химия основана на известном и понятном методе дериватизации AccQ • Tag. Первичные и вторичные аминокислоты реагируют с одним реагентом, AccQ • Fluor ™ в процессе высокопроизводительной партии, что приводит к получению исключительно стабильных производных. Разделение высокого качества достигается с помощью пре квалифицированных колонок и мобильных фаз AccQ • Tag Ultra UPLC. Дериватизованные аминокислоты количественно определяются на уровне суб-пикомоль УФ-детектированием с одной длиной волны.

Квалификация производительности

Квалификационные услуги, доступные для анализа аминокислот методом УЭЖХ, соответствуют самым строгим нормативным требованиям. Протоколы квалификации установки, эксплуатации и производительности (IQ / OQ / PQ) гарантируют, что каждый элемент системы работает в соответствии с назначением. Для проверки работоспособности и обеспечения точных результатов также доступен дополнительный PQ, специфический для анализа на аминокислоты.

Разрешение

Анализ стандарта гидролизата концентрации 10 пмоль/мл
img_amino

Решение для анализа аминокислот методом УЭЖХ обеспечивает высокое разрешение для обеспечения надежности метода с хорошей количественной оценкой. Короткая продолжительность цикла не влияет на точность результатов.

Эффективность

Эффективный, надежный анализ продуктов питания и кормов: гидролизат соевого шрота

img_amino

Проанализированы два образца гидролизованного соевого шрота. Верхняя хроматограмма показывает необработанный образец, в то время как нижняя показывает результаты окисления надмурашинои кислоты. Также, стоит обратить внимание на появление цистеиновых кислоты и метионина сульфона в окисленном образце.

Ключевые применения аминокислотного анализа

Для биофармацевтических целей

Точный и надежный анализ аминокислот служит в качестве основной информации в нескольких видах исследовательских проектов, а также в рутинном контроле качества и мониторинга процессов. В биохимическом структурном анализе аминокислотный состав гидролизованных белков используется для подтверждения последовательности и определения коэффициентов затухания. В отличие от измерений белковых аминокислот, свободные аминокислоты являются важными показателями метаболического статуса и генетического происхождения. Такие анализы нужны для различных применений, таких как оптимизация условий культуры клеток при производстве биофармацевтических препаратов, а также мониторинг процессов ферментации промышленного масштаба.

Попит цих застосувань призвів до винаходу амінокислотних аналізаторів та постійного вдосконалення технології протягом кількох десятиліть. Загальне програмне рішення Було розроблено "під ключ". Методика заснована на добре вивченому протоколі дериватизації з подальшим хроматографічним розділенням високої здатності. Амінокислоти дериватизуються 6-амінохіноліл-N-гідроксисукциніміл карбаматом (AQC) у значних водних умовах. Похідні відокремлюють за допомогою рідинної хроматографії УЕРХ (UPLC). Підвищена роздільна здатність УЕРХ забезпечує надійний хроматографічний метод, який дає точні результати вимірювань.

Эта методика широко применяется в биофармацевтических лабораториях с момента ее внедрения в 2007 году. Это готовое решение для анализа аминокислот методом УЭЖХ теперь доступно для конфигураций ACQUITY UPLC (бинарное смешивания растворителей) и ACQUITY UPLC H-класс и Bio- (четвертичное смешивания) H-класс и протоколов обнаружения с задокументированной линейностью и точностью. Постоянное совершенствование этого прикладного решения обеспечивает наиболее удобное и эффективное создание надежных анализов аминокислот.

AКА для белков, сред клеточной культуры и кормов

Анализ аминокислот является важным для различных исследовательских проектов, а также для рутинного контроля качества и мониторинга процессов. Успешный анализ требует учета пробоподготовки, разделения и детектирования аминокислот. Система анализа аминокислот УЭЖХ предназначена для предоставления точного определения широкого спектра типов образцов. Аминокислоты дериватизируют с помощью реакции с 6-аминохинолил-N-гидроксисукцинимилкарбаматом и отделяют с помощью обратной фазы УЭЖХ. Соответствие этого метода подтверждено в нескольких программах.

Аминокислотный состав кислотных гидролизованных чистых белков сравнивали с ожидаемыми значениями из известной последовательности. Аминокислоты как метаболические показатели измеряли в среде растущих клеточных культур, различных продуктах питания и напитках. Питательное содержание кормов также определялся после гидролиза. Оптимизация обработки для каждого типа выборки дала более надежные результаты. Чрезвычайная чувствительность методов дериватизации и разделения упростила некоторые аспекты подготовки пробы, облегчив оптимизацию других.

Использования методов микроволнового гидролиза послужило практическим дополнением к общему аналитического процесса для образцов кормов. Образцы кормов подвергались кислотному гидролизу как с оксидированием, так и без, а также щелочным гидролизом для полного профиля аминокислоты и, следовательно, содержания белка. Пропускная способность обработки образцов была гораздо выше при таком подходе и была совместима с аналитической пропускной способностью системы.

Эти эксперименты демонстрируют пригодность процедур обработки образцов и системы анализа аминокислот.

Гибкая методология

Анализ стандартов гидролизата и клеточной культуры

img_amino

Верхня хроматограма показує результати аналізу стандарту гідролізату при 10 пмоль/мл, а нижня хроматограма стандартної суміші більшої кількості амінокислот, виявлених у середовищі клітинної культури, також при 10 пмоль/мл. Адаптація способу вимагає лише зміни розведення концентрату елюенту А, що подається як частина загального розчину системи.

Анализ культуры клеток

Прямой анализ клеточной культуры

img_amino

Аликвоты сред клеточной культуры были взяты непосредственно из биореактора, что производит биофармацевтический белок. Образцы брали в течение шести дней, и не нужно было заниматься пробоподготовкой перед анализом аминокислот. Тенденции концентрации аминокислот можно воспринять как реакции клеток на рост, так и в качестве реакции на количество потребленного.